उत्पादने

5-फ्लोरोरासिल (5-FU) आणि दोन अंतर्जात मोनोफॉस्फेट न्यूक्लियोटाइड्सच्या अनेक चयापचयांचे प्रमाण निश्चित करण्यासाठी, आम्ही लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी-टँडम मास स्पेक्ट्रोमेट्री (LC-MS/MS) वर आधारित मूळ पद्धत विकसित केली.या तपासणीने खालील गोष्टींचे निर्धारण करण्यास अनुमती दिली: (i) 5-FU किंवा 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) पासून 5-फ्लोरो-2′-डीऑक्स्युरिडाइन-5′-मोनोफॉस्फेट (5-FdUMP) चे इंट्रासेल्युलर उत्पादन , (ii) इंट्रासेल्युलर 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) गुणोत्तरावर 5-FdUMP एकाग्रतेचा प्रभाव आणि (iii) 5-FdUMP च्या स्राव व्याप्ती आणि एबीसी ट्रान्सपोर्टर्सद्वारे मानवी सुसंस्कृत पेशींमधून 5-FU.आमच्या प्रायोगिक परिस्थितीत, पेशी 5-FU किंवा 5-FUrd सह उष्मायन केल्या गेल्या.त्यानंतर, सेल्युलर प्रथिने मिथेनॉलद्वारे अवक्षेपित केली गेली.या प्रक्रियेने उच्च निष्कर्षण पुनर्प्राप्ती प्रदान केली.याव्यतिरिक्त, पेशींमधून 5-FU आणि 5-FdUMP स्राव मोजण्यासाठी, आम्ही संस्कृती माध्यमात या रेणूंचे प्रमाणीकरण केले.मीडिया एकतर थेट इंजेक्शनने (5-FU) होते किंवा ओएसिस वॅक्स एक्स्ट्रॅक्शन कार्ट्रिज (5-FdUMP) वापरून ठोस टप्प्यात काढण्यात आले होते.मोबाइल फेज म्हणून अमोनियम फॉर्मेट बफर/मिथेनॉल/वॉटर (5/5/90, v/v) वापरून आयसोक्रेटिक मोडसह dC18 Atlantis 3.5 μm, (100 mm × 2.1 mm id) स्तंभावर विश्लेषकांचे पृथक्करण केले गेले.धावण्याची वेळ 6.2 मिनिटांपेक्षा जास्त नाही.विश्लेषकांना नकारात्मक आयन मोड अंतर्गत इलेक्ट्रोस्प्रे इंटरफेसमध्ये आयनीकरण केले गेले.आम्ही संयुगेनुसार 2.5-150 ng mL −1 च्या श्रेणीमध्ये पद्धत प्रमाणित केली.आंतर- आणि आंतर-परीक्षण परिवर्तनशीलता सात दिवसांमध्ये 10% पेक्षा कमी होती.सर्व संयुगे पेशींमध्ये किंवा संस्कृतीच्या माध्यमात स्थिर होते जेव्हा नमुने किमान दोन आठवडे −20 °C वर साठवले जातात आणि तीन फ्रीझ-थॉ चक्रांनंतर.दोन्ही माध्यमांमध्ये कोणताही मॅट्रिक्स प्रभाव दिसून आला नाही.