उत्पादने

युकेरियोटिक पेशींमध्ये चार डीऑक्सीरिबोन्यूक्लिओसाइड ट्रायफॉस्फेट्स (dNTPs) च्या मिनिटाच्या प्रमाणात नाजूक संतुलन असते, जे फक्त काही मिनिटांच्या डीएनए प्रतिकृतीसाठी पुरेसे असते.एकाच dNTP ची कमतरता आणि अधिशेष दोन्हीमुळे उत्परिवर्तन दर वाढू शकतात, दोषपूर्ण DNA दुरुस्ती किंवा माइटोकॉन्ड्रियल DNA कमी होऊ शकते.dNTPs ची सामान्यत: एन्झाईमॅटिक परख द्वारे परिमाणे केली जाते ज्यामध्ये किरणोत्सर्गी dATP (किंवा dATP साठी परख मध्ये किरणोत्सर्गी dTTP) DNA पॉलिमरेझद्वारे विशिष्ट कृत्रिम ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्समध्ये समाविष्ट करणे अज्ञात dNTP च्या एकाग्रतेच्या प्रमाणात असते.आम्हाला आढळले की सामान्यतः वापरले जाणारे Klenow DNA पॉलिमरेझ अज्ञात dNTP साठी संबंधित रिबोन्यूक्लियोटाइड बदलू शकते ज्यामुळे काही घटनांमध्ये dNTPs च्या मोठ्या प्रमाणामध्ये वाढ होते.आम्ही आता प्रत्येक dNTP साठी परख अटींचे वर्णन करतो जे ribonucleotide incorporation टाळतात.dTTP आणि dATP परीक्षणांसाठी ते Klenow एन्झाइम आणि लेबल केलेल्या dATP (किंवा dTTP) च्या एकाग्रता कमी करण्यासाठी पुरेसे आहे;dCTP आणि dGTP साठी आम्हाला टी हे क्लेनॉ एन्झाइम एकतर Taq DNA पॉलिमरेझ किंवा थर्मो सिक्वेनेससह बदलले पाहिजे.आम्‍ही सुचवितो की काही पूर्वीच्‍या अहवालांमध्‍ये रिबोन्यूक्लियोटाइड इनकॉर्पोरेशनमुळे dGTP आणि dCTP साठी खूप उच्च मूल्ये निर्माण झाली असतील.