उत्पादने

प्रोटीओम-वाइड फॉस्फोरिलेशन इव्हेंट्सचे विश्लेषण अद्याप प्रोटीन फॉस्फोरिलेशन नेटवर्कच्या प्रचंड जटिलतेमुळे एक प्रमुख विश्लेषणात्मक आव्हान आहे.या कार्यात, आम्ही फॉस्फोप्रोटीओमच्या जागतिक विश्लेषणामध्ये योगदान देण्याच्या क्षमतेच्या संदर्भात Lys-N, Lys-C आणि ट्रिप्सिनच्या पूरकतेचे मूल्यांकन करतो.एन-टर्मिनली एसिटिलेटेड, फॉस्फोरीलेटेड आणि नॉनमॉडिफाइड पेप्टाइड्स कार्यक्षमपणे वेगळे करण्यासाठी लो-पीएच मजबूत केशन एक्सचेंजची परिष्कृत आवृत्ती वापरली गेली.एकूण 5036 गैर-रिडंडंट फॉस्फोपेप्टाइड्स तीन एन्झाईम्सच्या मिश्रणाचा वापर करून 1 मिलीग्राम प्रथिनातून <1% च्या खोट्या शोध दराने ओळखले जाऊ शकतात.आमच्या डेटावरून असे दिसून आले की वेगवेगळ्या प्रोटीजसह व्युत्पन्न केलेल्या फॉस्फोपेप्टाइड डेटा सेटमधील ओव्हरलॅप किरकोळ होता, तर दोन समान व्युत्पन्न केलेल्या ट्रायप्टिक डेटा सेटमधील ओव्हरलॅप किमान 4 पट जास्त असल्याचे आढळले.अशाप्रकारे, Lys-N आणि ट्रिप्सिनच्या समांतर वापराने डिटेक्ट केलेल्या फॉस्फोपेप्टाइड्सच्या संख्येत एकट्या ट्रिप्सिनच्या तुलनेत 72% वाढ झाली, तर ट्रिप्सिनच्या प्रतिकृती प्रयोगामुळे केवळ 25% वाढ झाली.अशाप्रकारे, ट्रिप्सिन आणि Lys-N डेटावर पूर्णपणे लक्ष केंद्रित करताना, आम्ही 4671 गैर-रिडंडंट फॉस्फोपेप्टाइड्स ओळखले.शोधलेल्या साइट्सच्या पुढील विश्लेषणातून असे दिसून आले आहे की Lys-N आणि ट्रिप्सिन डेटा संच लक्षणीय भिन्न फॉस्फोरिलेशन आकृतिबंधांमध्ये समृद्ध होते, पुढे हे सिद्ध होते की फॉस्फोप्रोटीओम विश्लेषणांमध्ये मल्टीप्रोटीज दृष्टिकोन खूप मौल्यवान आहेत.