उत्पादने

कपोसीच्या सारकोमा-संबंधित नागीण व्हायरस (KSHV) चे ORF45 प्रोटीन हे गॅमाहेरपीस विषाणू-विशिष्ट तात्काळ-लवकर टेग्युमेंट प्रोटीन आहे.आमच्या मागील अभ्यासांनी KSHV संसर्गाच्या सुरुवातीच्या आणि उशीरा अशा दोन्ही टप्प्यांमध्ये त्याची महत्त्वपूर्ण भूमिका उघड केली आहे.या अभ्यासात, आम्ही मोनोक्लोनल अँटीबॉडीजच्या पॅनेलचा वापर करून ORF45 च्या परस्परसंवादाचे सर्वेक्षण केले.पूर्वी ओळखल्या गेलेल्या एक्स्ट्रासेल्युलर रेग्युलेटेड किनेज (ERK) आणि p90 ribosomal S6 kinase (RSK) प्रथिनांच्या व्यतिरिक्त, आम्हाला ∼38 kDa आणि ∼ 130 kDa च्या प्रमुख प्रथिनेंसह इतर अनेक कॉप्युरिफाईड प्रोटीन आढळले.मास स्पेक्ट्रोमेट्रीने असे दिसून आले की 38-kDa प्रथिने विषाणूजन्य ORF33 आहे आणि 130-kDa प्रोटीन सेल्युलर USP7 (ubiquitin-specific protease 7) आहे.आम्ही ORF33-बाइंडिंग डोमेन ORF45 च्या अत्यंत संरक्षित कार्बोक्झिल-टर्मिनल 19 एमिनो ऍसिड (aa) आणि USP7-बाइंडिंग डोमेनला ORF45 च्या मध्यवर्ती प्रदेशात नोंदवलेल्या सहमती स्वरूपाशी मॅप केले.इम्युनोफ्लोरेसेन्स स्टेनिंगचा वापर करून, आम्ही ORF33 किंवा USP7 सह ORF45 चे एकत्रीकरण ट्रान्सफेक्ट कंडीट आयन अंतर्गत आणि KSHV-संक्रमित पेशींमध्ये पाहिले.शिवाय, न्यूक्लियसपासून सायटोप्लाझमपर्यंत ORF33/USP7 च्या एका भागाचे ORF45-आश्रित पुनर्स्थानीकरण आमच्या लक्षात आले.आम्‍हाला आढळले की ORF45 मुळे ORF33 प्रोटीन जमा होण्‍यात वाढ झाली जी ORF45 मधील ORF33- किंवा USP7-बाइंडिंग डोमेन हटवल्‍यास रद्द केली गेली.शिवाय, KSHV जीनोममधील ORF45 चे संरक्षित कार्बोक्झिल टर्मिनस हटवल्यामुळे KSHV-संक्रमित पेशींमध्ये ORF33 प्रथिनांची पातळी कमालीची कमी झाली आणि प्रोजेनी व्हायरसचे उत्पादन रद्द केले.एकत्रितपणे, आमचे परिणाम केवळ ORF45 इंटरॅक्टोमचे नवीन घटकच प्रकट करत नाहीत, तर KSHV लाइटिक प्रतिकृतीसाठी या प्रथिनांमधील परस्परसंवाद महत्त्वपूर्ण आहेत हे देखील दाखवतात. कापोसीचा सारकोमा-संबंधित नागीण विषाणू (KSHV) हा अनेक मानवी कर्करोगाचा कारक घटक आहे.KSHV ORF45 हे एक बहुकार्यात्मक प्रथिन आहे जे KSHV लाइटिक प्रतिकृतीसाठी आवश्यक आहे, परंतु ORF45 त्याची गंभीर कार्ये कोणत्या अचूक यंत्रणेद्वारे करते हे स्पष्ट नाही.आमच्या मागील अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की पेशींमधील सर्व ORF45 pr otein उच्च-आण्विक-वजन असलेल्या कॉम्प्लेक्समध्ये अस्तित्वात आहेत.म्हणून आम्ही lytic प्रतिकृती दरम्यान त्याच्या भूमिकांबद्दल अंतर्दृष्टी प्रदान करण्यासाठी ORF45 च्या परस्परसंवादाचे वैशिष्ट्यीकृत करण्याचा प्रयत्न केला.मोनोक्लोनल ऍन्टीबॉडीजच्या पॅनेलचा वापर करून, आम्ही KSHV-संक्रमित पेशींमध्ये ORF45 इंटरॅक्टोमचे सर्वेक्षण केले.आम्ही ORF45 चे दोन नवीन बंधनकारक भागीदार ओळखले: व्हायरल प्रोटीन ORF33 आणि सेल्युलर ubiquitin-विशिष्ट प्रोटीज 7 (USP7).आम्ही पुढे दाखवून देतो की KSHV विषाणू कणांच्या कार्यक्षम उत्पादनासाठी ORF45 आणि ORF33 मधील परस्परसंवाद महत्त्वपूर्ण आहे, हे सूचित करते की या परस्परसंवादासह लक्ष्यित हस्तक्षेप KSHV लाइटिक प्रतिकृती रोखण्यासाठी एक नवीन धोरण दर्शवू शकतो.