उत्पादने

कोलिसिन E1 चॅनेल डोमेनच्या मेम्ब्रेन टोपोलॉजीचा फ्लोरोसेन्स रेझोनान्स एनर्जी ट्रान्सफर (FRET) द्वारे अभ्यास करण्यात आला.FRET मध्ये दाता म्हणून अनुवांशिकरित्या एन्कोड केलेले फ्लोरोसेंट अमीनो ऍसिड (कौमरिन) आणि FRET स्वीकारकर्ता म्हणून DABMI (4-(डायमेथिलामिनो)फेनिलाझोफेनिल-4'-मलेमाइड) सह टेदर केलेले निवडक लेबल केलेले सिस्टीन अवशेष समाविष्ट होते.फ्लोरोसेंट कौमरिन अवशेष ऑर्थोगोनल tRNA/aminoacyl-tRNA सिंथेटेस जोडीद्वारे प्रथिनेमध्ये समाविष्ट केले गेले ज्याने कोलिसिन चॅनेल डोमेनमधील कोणत्याही साइटमध्ये निवडक समावेश करण्याची परवानगी दिली.प्रत्येक वेरिएंटमध्ये कौमरिन इन्कॉर्पोरेशनसाठी स्टॉप (TAG) उत्परिवर्तन आणि DABMI संलग्नकासाठी सिस्टीन (TGT) उत्परिवर्तन होते.हेलिकेस 1-6 मधील सहा इंटरहेलिकल अंतर दोन्ही विद्रव्य आणि पडदा-बद्ध अवस्थांसाठी FRET विश्लेषण वापरून निर्धारित केले गेले.FRET डेटाने चॅनेल डोमेनच्या मेम्ब्रेन-बाउंड स्ट्रक्चरमध्ये नवीन अंतर्दृष्टी प्रदान केल्यावर पडदा असोसिएशन 3-6 हेलिकेसमधील इंटरहेलिकल अंतरामध्ये मोठे बदल दर्शविले.सर्वसाधारणपणे, coumarin-DABMI FRET इंटरहेलिकल कार्यक्षमता झिल्ली बंधनकारक केल्यावर कमी होते, कोलिसिन चॅनेलसाठी छत्री मॉडेलवर तयार होते.चॅनेल डोमेनच्या बंद स्थितीसाठी तात्पुरते मॉडेल वर्तमान आणि पूर्वी प्रकाशित FRET डेटावर आधारित विकसित केले गेले.मॉडेल हेलिसेस 1-7 ची ​​बाह्यकोशिक बाजूपासून घड्याळाच्या दिशेने गोलाकार मांडणी सुचवते आणि हेलिसेस 1, 6, 7, आणि 10 च्या झिल्ली इंटरफेसियल असोसिएशन हेलिकेस 8 आणि 9 द्वारे तयार केलेल्या मध्यवर्ती ट्रान्समेम्ब्रेन हेअरपिनच्या आसपास.