उत्पादने

अँथ्रॅनिलिक ऍसिड आणि फ्लूरोसेन्स डिटेक्शनसह डेरिव्हेटायझेशनवर आधारित ग्लायकोसिलट्रान्सफेरेससाठी नवीन उच्च-कार्यक्षमता लिक्विड क्रोमॅटोग्राफी परख.

उच्च-कार्यक्षमता द्रवाद्वारे β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) आणि α2-6 sialyltransferase (ST-6) या दोन्ही क्रियाकलापांचे मोजमाप करण्यासाठी 2-aminobenzoic acid (2AA; anthranilic acid, AA) च्या अद्वितीय लेबलिंग रसायनशास्त्राचा वापर करून अॅसे विकसित केले गेले. फ्लोरोसेन्स डिटेक्शनसह क्रोमॅटोग्राफी (एचपीएलसी) (अनुमुला केआर. 2006. ग्लायकोप्रोटीन कार्बोहायड्रेट्सच्या उच्च-कार्यक्षमता लिक्विड क्रोमॅटोग्राफिक विश्लेषणासाठी फ्लूरोसेन्स डेरिव्हेटायझेशन पद्धतींमध्ये प्रगती. गुदद्वारासंबंधीचा बायोकेम. 350:1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) आणि N-acetyllactosamine हे अनुक्रमे GalT-1 आणि ST-6 साठी दाता म्हणून स्वीकारणारे आणि uridine diphosphate (UDP)-galactose आणि cytidine monophosphate (CMP)-N-acetylneuraminic acid (NANA) म्हणून वापरले गेले.एंजाइमॅटिक उत्पादनांना AA सह स्थितीत लेबल केले गेले आणि सामान्य-फेज परिस्थिती वापरून TSKgel Amide 80 स्तंभावरील सब्सट्रेट्सपासून वेगळे केले गेले.Gal-β1-4GlcNAc आणि NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc या एकाचवेळी व्युत्पन्न केलेल्या मानकांशी तुलना करून एन्झाईम युनिट्स शिखर क्षेत्रांमधून निर्धारित केले गेले.रेखीयता (वेळ आणि सजीवांच्या शरीरात निर्मार्ण होणारे द्रव्य एकाग्रता), अचूकता (इंट्रा- आणि इंटरसे) आणि परीक्षणासाठी पुनरुत्पादनक्षमता स्थापित केली गेली.पृथक्करण आणि शुध्दीकरणादरम्यान एन्झाइमच्या क्रियाकलापांचे निरीक्षण करण्यासाठी परख उपयुक्त असल्याचे आढळले.हे परीक्षण अत्यंत संवेदनशील होते आणि पारंपारिक किरणोत्सर्गी साखर-आधारित मोजमापांच्या बरोबरीने किंवा चांगले केले गेले.कार्बोहायड्रेट स्वीकारणार्‍यांमध्ये लेबलिंगसाठी कमी करणारा अंत असेल तर, इतर हस्तांतरणाच्या क्रियाकलाप मोजण्यासाठी देखील परखचे स्वरूप वापरले जाऊ शकते.IgG वापरून ग्लायकोप्रोटीन स्वीकारणाऱ्यांसाठी एक परख विकसित केली गेली.IgG glycans (biantennary G0, G1, G2, mono- आणि disialylated) च्या पृथक्करणासाठी एक लहान HPLC प्रोफाइलिंग पद्धत विकसित केली गेली, ज्यामुळे GalT-1 आणि ST-6 क्रियाकलापांचे जलद रीतीने निर्धारण करणे सुलभ झाले.शिवाय, ही प्रोफाइलिंग पद्धत क्लिनिकल सेटिंग्जमध्ये IgG ग्लाइकन्समधील बदलांचे निरीक्षण करण्यासाठी उपयुक्त ठरली पाहिजे.