उत्पादने

एंझाइमॅटिक क्रियाकलाप बदलण्यासाठी एकाचवेळी उत्परिवर्तनांचे परिणाम ज्या पद्धतीने एकत्रित होतात ते सहजपणे सांगता येत नाही कारण हे परिणाम नेहमीच रेखीय पद्धतीने जोडलेले नसतात.म्हणून, सब्सट्रेटला बांधणाऱ्या अमीनो ऍसिडच्या अवशेषांच्या एकाचवेळी उत्परिवर्तनाच्या परिणामांचे वैशिष्ट्यीकरण एन्झाईम्सच्या सब्सट्रेट विशिष्टतेच्या आकलनासाठी महत्त्वपूर्ण योगदान देऊ शकते.स्पोडोप्टेरा फ्रुगीपर्डा (Sfbetagly) मधील बीटा-ग्लायकोसिडेसमध्ये, Q39 आणि E451 दोन्ही अवशेष सब्सट्रेटशी संवाद साधतात आणि हे सब्सट्रेट विशिष्टता परिभाषित करण्यासाठी आवश्यक आहे.Sfbetagly (A451E39, S451E39 आणि S451N39) चे दुहेरी उत्परिवर्तन साइट-निर्देशित म्युटाजेनेसिसद्वारे तयार केले गेले, जिवाणूंमध्ये व्यक्त केले गेले आणि अॅफिनिटी क्रोमॅटोग्राफी वापरून शुद्ध केले गेले.हे एन्झाईम पी-नायट्रोफेनिल बीटा-गॅलेक्टोसाइड आणि पी-नायट्रोफेनिल बीटा-फ्यूकोसाइड सब्सट्रेट म्हणून वापरून वैशिष्ट्यीकृत केले गेले.Q39 आणि E451 स्थानांवर साइट-निर्देशित उत्परिवर्तन असलेल्या Sfbetagly च्या सिंगल आणि दुहेरी उत्परिवर्तनांसाठी k cat/Km गुणोत्तर हे दाखवण्यासाठी वापरले गेले की दुहेरी उत्परिवर्तन (Gdouble) च्या ESdouble खंजीर (एंझाइम-ट्रान्झिशन स्टेट कॉम्प्लेक्स) च्या मुक्त उर्जेवर परिणाम होतो. daggerxy) एकल उत्परिवर्तन (Gdouble daggerx आणि Gdouble daggery) मुळे होणाऱ्या परिणामांची बेरीज नाही.Gdouble dagger मधील हा फरक सूचित करतो की एकल उत्परिवर्तनांचे परिणाम अंशतः ओव्हरलॅप होतात.म्हणून, हा सामान्य परिणाम Gdouble daggerxy मध्ये फक्त एकदाच मोजला जातो.बीटा-ग्लायकोसिडेसेसवरील क्रिस्टलोग्राफिक डेटा Q39 आणि E451 अवशेष आणि सब्सट्रेटच्या समान हायड्रॉक्सिल गटाचा समावेश असलेल्या बिडेंटेट हायड्रोजन बाँडची उपस्थिती प्रकट करतो.म्हणून, दोन्ही थर्मोडायनामिक आणि क्रिस्टलोग्राफिक डेटा सूचित करतात की Q39 आणि E451 अवशेष त्यांच्या सब्सट्रेटशी संबंधित परस्परसंवादांवर परस्पर प्रभाव पाडतात.