उत्पादने

मानवी आतड्यांमधील अल्फा-मॅनोसिडेसेसच्या Ca2+-आश्रित कुटुंबातील यांत्रिक अंतर्दृष्टी.

बॅक्टेरॉइड्स thetaiotaomicron द्वारे उदाहरण दिलेले कॉलोनिक बॅक्टेरिया, ग्लायकोसाइड हायड्रोलासेस (GHs) च्या मोठ्या कुटुंबांचा वापर करून आहारातील पॉलिसेकेराइड्स आणि ग्लायकन्स पोषक घटक म्हणून शोषण करून मानवी आरोग्य राखण्यात महत्त्वाची भूमिका बजावतात.अशा GH कुटुंब विस्ताराचे उदाहरण B. thetaiotaomicron जीनोम द्वारे एन्कोड केलेल्या 23 फॅमिली GH92 ग्लायकोसिडेसेसद्वारे दिले जाते.येथे आम्ही दर्शवितो की हे अल्फा-मॅनोसीडेसेस आहेत जे होस्ट एन-ग्लायकन्स वापरण्यासाठी एकाच विस्थापन यंत्रणेद्वारे कार्य करतात.दोन GH92 mannosidases ची त्रिमितीय रचना दोन-डोमेन प्रथिनांचे एक कुटुंब परिभाषित करते ज्यामध्ये उत्प्रेरक केंद्र डोमेन इंटरफेसवर स्थित आहे, Ca(2+) मध्ये हायड्रोलिसिससाठी ऍसिड (ग्लूटामेट) आणि बेस (एस्पार्टेट) सहाय्य प्रदान करते - अवलंबून पद्धत.इनहिबिटरसह कॉम्प्लेक्समधील GH92s च्या त्रि-आयामी संरचना उत्प्रेरकाची विशिष्टता, यंत्रणा आणि संरचनात्मक प्रवासाची अंतर्दृष्टी प्रदान करतात.Ca(2+) मॅनोसाइडला त्याच्या ग्राउंड-स्टेट (4)C(1) चेअर कॉन्फॉर्मेशनपासून संक्रमण स्थितीकडे विकृत करण्यात मदत करण्यात महत्त्वाची उत्प्रेरक भूमिका बजावते. (ग्रंथसूची: नॅट.केम.बायोल.६, १२५-३२, (२०१०)

कॉनकॅनॅव्हलिन ए-सेफेरोज स्तंभावर ओव्हलब्युमिन ग्लायकोस्पॅरॅजिन्सची फ्रंटल अॅफिनिटी क्रोमॅटोग्राफी.लेक्टिनच्या बंधनकारक विशिष्टतेचा परिमाणात्मक अभ्यास.

ओव्हलब्युमिनपासून मिळालेल्या 10 ग्लायकोअस्पॅरागिन्ससह सेफारोज 4B-इमोबिलाइज्ड कॉन्कनाव्हलिन A (ConA) च्या परस्परसंवादाची फ्रन्टल अॅफिनिटी क्रोमॅटोग्राफीद्वारे परिमाणात्मक तपासणी केली गेली.या पद्धतीमध्ये, एक कार्बोहायड्रेट द्रावण ConA-Sepharose स्तंभावर सतत लागू केले जाते आणि इल्युशन फ्रंटची मंदता परस्परसंवादाच्या सामर्थ्याचे मापदंड म्हणून मोजली जाते.ConA सह प्रत्येक सॅकराइडसाठी पृथक्करण स्थिरांक (Kd) निर्धारित केला जाऊ शकतो.p-nitrophenyl-alpha,D-mannoside च्या बांधणीच्या विश्लेषणात असे दिसून आले आहे की ConA चे बंधनकारक गुणधर्म Sepharose 4B वर स्थिर झाल्यानंतर मूलत: बदलत नाहीत.विश्लेषणासाठी रिडक्टिव्ह मेथिलेशन पद्धतीद्वारे प्रत्येक ओव्हलब्युमिन ग्लायकोस्पॅरॅजिन्सवर ट्रिटियम लेबल केले गेले.प्राप्त केलेल्या Kd मूल्यांची तुलना दर्शविते की ग्लायकोसिल साखळीच्या अगदी थोड्या संरचनात्मक फरकांसह ConA चे बंधन लक्षणीयरीत्या बदलते.परिणाम सूचित करतात की ConA एक विशिष्ट ग्लायकोसिल साखळी रचना ओळखते, मॅन अल्फा 1-6(मॅन अल्फा 1-3)मॅन, ज्यामध्ये C-6-लिंक्ड मॅनोजच्या C-3 स्थानावर किमान एक हायड्रॉक्सिल गट मुक्त असावा.